Profesor Hershel Layton — arkeolog terkenal, pemecah teka-teki, dan pria yang luar biasa — serta murid mudanya, Luke Triton, menerima surat misterius dari mantan muridnya Janice Quatlane yang berisi tiket untuk menhadiri opera di Crown Petone. Mereka segera menyadari bahwa itu bukan opera biasa, melainkan permainan yang cerdik bagi Mata Air Awet Muda yang legendaris — pemberi kehidupan yang kekal.

Meskipun dihadapkan dengan teka-teki yang rumit dan persaingan yang kuat, Profesor Layton dan asistennya yang tepercaya Luke tidak pernah lupa untuk
menjunjung tinggi standar pria sejati… dan seorang pria sejati tidak pernah meninggalkan teka-teki yang belum terpecahkan